蛋白质经SDS-PAGE后，胶片浸入转印缓冲液，蛋白质可被转印到硝化纤维纸（nitrocellulose） 上，先经尿素洗去SDS,并使蛋白质回复原态抗原性，可使用抗体进行免疫染色（Towbin et al, 1979）。

仪器用具：电泳转印槽系统：转印槽（可容纳2-4 个转印三明治）转印三明治 （转印夹、方形海绵垫2 片）；转印膜：Nc膜或者PVDF膜；滤纸两张，裁成比转印纸稍大者。供电器 （可供100~500 mA者）培养皿 （转印纸清洗用）旋转摇荡器 （rotary shaker）

药品试剂：

转印缓冲液 （Blotting buffer）：10×溶液

Tris （Tris base, 25 mM×10）60.6 g

甘胺酸 （0.192 M×10） 288 g加水1,500 mL 溶的，pH 以HCl 调到8.3,加水至2,000 mL 使用时取500 mL 倒入一5 L 桶中，加500 mL 甲醇后，加水到5 L,均匀搅拌的。 如此配成者，含10%甲醇；若是蛋白质的分子量太小，可提高到20%.

甲醇 （用来润湿PVDF转印膜）

PBST 洗液：PBST 为pH 7.0 的PBS （phosphate buffered saline） 缓冲液，另加有0.05%Tween-20,用来清洗转印纸，以去除非专一性的蛋白质吸附。

方法步骤：

◆ 全程请戴手套操作，以免污染转印膜！

1）电泳后SDS-PAGE 胶片浸在转印缓冲液中，洗2~3 次，每次10 min.

2）取出转印槽，先小心放一搅拌子在底部，再倒一半转印缓冲液。

3）取转印纸切成约如胶片大小，先在方形培养皿中以少许甲醇浸湿数秒钟，再置入转印槽中的缓冲液10 min 后使用。 另取两张滤纸，以及两片方形海绵垫，都放在转印槽的缓冲液中备用。

4）取出转印夹打开平放，先垫一张方形海棉垫，铺上一张湿滤纸，小心平铺SDS-PAGE胶上去，然后小心迭上已润湿的转印纸，用涂菌玻璃棒赶出气泡；转印纸再滴上数滴缓冲液后，加盖一层滤纸，及另一张海绵，也都不可陷入气泡，即可把整个转印三明治卡夹装好。

◆ 胶迭到转印纸时，最好一次成功，不要重作，否则蛋白质色带可能会印上去，最后产生重迭影像。

5）将转印三明治置入已经放有一半转印缓冲液的转印槽中，注意有转印纸的那一面向正极 （红色），胶片那面向负极 （黑色）。

6）当三明治都放入转印槽后，以转印缓冲液盖满所有的三明治，小心动一动卡夹，除去附在卡夹内外的气泡，盖上盖子，放到一搅拌器上，打开搅拌器开始搅拌，同时接好电源，装置完成后放置10 min.

7）以300 mA 开始转印，温度会渐渐上升，转印1.5 h左右 后中止转印，取出转印三明治，打开后依次取出转印纸及胶。

◆ 具体转印条件要根据蛋白的大小进行优化，注意低温。

8）转印后的胶片可以继续进行染色，看有无蛋白质残留。 若电泳时加有蓝色标准蛋白质marker （SeeBlue），则可在转印纸上看到蓝色的色带，确定转印成功，并可评估转印效率。